登革熱IgG間接法檢測(cè)試劑-澳洲PANBIO進(jìn)口

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA

產(chǎn)品目錄號(hào) 01PE30

預(yù)期用途

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 用于定性檢測(cè)登革熱病原血清型（1、2、3 和 4）血清中的 IgG 抗體， 輔助臨床實(shí)驗(yàn)室診斷出現(xiàn)臨床癥狀或既往感染登革熱病毒的患者。 

概述

蟲(chóng)媒病毒中的登革熱屬通過(guò)蚊子傳播，主要是埃及伊蚊和白紋伊蚊。登革熱病毒感染，與傷寒病有關(guān)，其特征是突然發(fā)熱、劇烈頭痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛和皮疹。登革熱感染的嚴(yán)重并發(fā)癥包括登革出血熱和登革休克綜合征。此類(lèi)并發(fā)癥的發(fā)病率增加與繼發(fā)性感染不同登革熱血清型有關(guān)。

通過(guò)ELISA 對(duì)四種登革熱血清型的 IgG 類(lèi)特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)，是一種診斷既往感染登革熱病毒的患者的重要方法。 配對(duì)血清中 IgG ， 水平不斷升高是活動(dòng)性登革熱感染的表現(xiàn)。傳統(tǒng)上，血凝抑制試驗(yàn)（HAI）滴度被用于劃分原發(fā)性或繼發(fā)性感染。當(dāng)前的界定方法是采用及時(shí)分離至少 7 天的配對(duì)血清標(biāo)本檢測(cè)，急性標(biāo)本的 HAI 滴度≥ 1:2560 被認(rèn)為患者感染了繼發(fā)性黃病毒 ¹。 

檢測(cè)原理

血清中存在的登革熱病毒抗體，與微孔測(cè)試條上聚苯乙烯表面附著的登革熱抗原結(jié)合物相結(jié)合。洗去剩余的血清并添加過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人 IgG 抗體。清洗微孔，再添加無(wú)色的底物系統(tǒng) - 四甲基聯(lián)苯胺/過(guò)氧化氫（TMB 顯色液）。底物被酶水解后，顯色液變藍(lán)。用酸終止反應(yīng)后，TMB 變黃。顯色表示測(cè)試樣本中存在登革熱 IgG 抗體。

提供的材料

1. 登革熱抗原（血清型 1、2、3 和 4）包被微孔板-（12x8 孔）。即用型。未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

2. 清洗緩沖液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20 和防腐劑

（0.1% Proclin™）。低溫可能結(jié)晶。若去除結(jié)晶，可在 37℃孵育液體至澄清。混合均勻。用 19 體積的蒸餾水稀釋 1 體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在 2-25℃儲(chǔ)存一周。

3. 樣本稀釋劑– 2 瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris 緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

4. HRP 標(biāo)記抗人 IgG – 1 瓶，15mL（綠色）。即用型。辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗人 IgG， 含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩(wěn)定劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

5. TMB 顯色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和過(guò)氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

6. 陽(yáng)性質(zhì)控品– 1 瓶，紅色瓶蓋，200μL 人血清（含 0.1%疊氮話(huà)鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

7.  校準(zhǔn)品– 1 瓶，黃色瓶蓋，400μL 人血清（含 0.1%疊氮話(huà)鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

8. 陰性質(zhì)控品– 1 瓶，綠色瓶蓋，200μL 人血清（含 0.1%疊氮話(huà)鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

9. 終止液 – 1 瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M 磷酸。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-25℃可保持穩(wěn)定。 

Proclin™ 300 是 Rohm 和 Haas 公司的注冊(cè)商標(biāo)。

需要但未提供的材料

1. 精確、可調(diào)節(jié)的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL 容積）

2. 去離子水

3. 標(biāo)板清洗系統(tǒng)

4. 酶標(biāo)儀，含 450nm 濾波器

5. 計(jì)時(shí)器

6. 刻度量筒

7. 燒瓶

8. 試管或微滴定板，用于稀釋血清

 注意事項(xiàng)

用于體外診斷

1. 在制備質(zhì)控品的過(guò)程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過(guò)人類(lèi)免疫缺陷病毒 1/2（HIV 1 /2）抗體、丙肝

（HCV）和乙肝表面抗原的檢測(cè)，結(jié)果為陰性。但是，任何測(cè)試方法都不能*確信，且所有人源性質(zhì)控品和抗原包被微孔板都應(yīng)按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預(yù)防中心以及美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級(jí) ² 處理。

2. 該測(cè)試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標(biāo)本基質(zhì)的方法。

3. 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現(xiàn)溶血或微生物生長(zhǎng)的血清。

4. 不可加熱，否則血清將失去活性。

5. 在開(kāi)始檢測(cè)前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測(cè)受溫度變化的影響。微孔板在達(dá)到室溫

（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。

6. 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉(zhuǎn)移試劑可能導(dǎo)致污染。

7. 未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。否則將產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。

8. 底物系統(tǒng)：

(a) 由于 TMB 易受金屬離子的污染，所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。

(b) 避免長(zhǎng)時(shí)間陽(yáng)光直射。

(c) 有些清潔劑可干擾 TMB 的性能。

(d) TMB 可能呈現(xiàn)淡藍(lán)色，這不影響底物的活性或測(cè)定結(jié)果。

1. 某些試劑盒組成包含疊氮話(huà)鈉，疊氮話(huà)鈉可能與鉛或銅管反應(yīng)形成極易爆炸的金屬疊氮化合物。通過(guò)管道裝置處理這些試劑時(shí)，請(qǐng)用大量清水沖洗以避免疊氮化物在排水管內(nèi)累積。

2. 疊氮話(huà)鈉還抑制酶標(biāo)物的活性。在添加酶標(biāo)物時(shí)必須使用干凈的吸液頭，避免攜帶其它試劑的疊氮話(huà)鈉。

3. 根據(jù)適用的歐洲共同體（EC）指令，產(chǎn)品組成的危害信息如下：

如需更多安全信息，請(qǐng)參考 STANDARD DIAGNOSTICS, INC.的安全數(shù)據(jù)表（SDS）。

標(biāo)本采集和制備

靜脈穿刺獲取的血液應(yīng)該置于室溫（20-25℃）下直到凝塊形成，再按照臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究院（CLSI） 的《認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)——診斷用血液標(biāo)本的靜脈穿刺采集程序，H3》離心。應(yīng)該盡快分離血清。如果在 2 天內(nèi)不進(jìn)行檢測(cè)，血清應(yīng)該 2-8℃冷藏或者低于或等于- 20℃冷凍儲(chǔ)存。不*使用自解凍冷凍機(jī)儲(chǔ)存血清。不*使用黃疸血清，以及出現(xiàn)溶血、脂血或微生物生長(zhǎng)的血清。CLSI 提供了儲(chǔ)存血液標(biāo)本的建議，《認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)——血液標(biāo)本的處理加工程序，H18》。

檢測(cè)程序

注： 確保所有試劑在開(kāi)始測(cè)定前平衡至室溫（20-25℃）。在所給時(shí)間和溫度范圍以外進(jìn)行測(cè)試可能產(chǎn)生無(wú)效的結(jié)果。不在預(yù)定時(shí)間和溫度范圍內(nèi)的測(cè)試必須進(jìn)行重復(fù)。

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